碧云天生产的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)，后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase)，并且在后续加入海肾萤光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质，该物质可以淬灭约99.9%以上的萤火虫萤光素酶信号，使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，从而实现双萤光素酶报告基因检测。

本产品是双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。本产品，即RG027/RG028中的萤火虫萤光素酶检测试剂为即用型液体，其优点是无需配制即可直接使用，但需要-80℃保存，如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)中的萤火虫萤光素酶检测试剂，为RG027/RG028的冻干粉版本，优点是在-20℃保存非常稳定，缺点是使用前需要使用提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。

本产品的性能总体优于国外主要同类产品。本产品的用途与Promega公司的Dual-Luciferase® Reporter Assay System基本相同。本产品的检测灵敏度显著优于国外同类产品(Competitor P)，萤火虫萤光素酶的信号强度比国外同类产品(Competitor P)提高了约40%，海肾萤光素酶的信号强度比同类产品(Competitor P)提高了约25% (图1A、1B)；萤火虫萤光素酶的化学发光的信号稳定性显著优于国外同类产品(Competitor P) (图1C)，海肾萤光素酶的化学发光的信号稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致或略优(图1D)；本产品的海肾萤光素酶检测工作液对萤火虫萤光素酶的淬灭效果较国外同类产品(Competitor P)更佳(图1A)。本产品与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。

图1. 双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)的检测效果对比图。图中所示为本产品和国外同类产品(Competitor P)对共转染萤火虫萤光素酶报告基因质粒和海肾萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为整体检测效果对比图，图B为萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶的化学发光强度的检测效果对比图，图C为萤火虫萤光素酶的化学发光稳定性的检测效果对比图，图D为海肾萤光素酶的化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品发光强度高。对于相同的样品，对萤火虫萤光素酶的检测，本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)高约30-45%，对海肾萤光素酶的检测，本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)高约20-30% (图1A、B)。

本产品操作简单，读数稳定，检测速度快，从样品制备到完成整个检测过程仅需约25分钟。本试剂盒中提供的萤火虫萤光素酶检测试剂为即用型试剂，海肾萤光素酶检测底物和海肾萤光素酶检测缓冲液按照1:100的比例混合即可配制成海肾萤光素酶检测工作液，再各取100微升先后与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且化学发光比较稳定，萤火虫萤光素酶的信号半衰期约15分钟，海肾萤光素酶的信号半衰期约200秒。

本产品的海肾萤光素酶检测工作液对萤火虫萤光素酶的淬灭效果好。本试剂盒中的海肾萤光素酶检缓冲液和海肾萤光素酶检测底物配制的海肾萤光素酶检测工作液含有抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质，海肾萤光素酶检测试剂加入后通过简单的混匀，就可以抑制99.9%以上的萤火虫萤光素酶催化的发光信号，大大提高了后续海肾萤光素酶活性检测的精准性。

本产品稳定性好。本试剂盒中的萤火虫萤光素酶检测试剂、海肾萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测底物(100X)的稳定性均较好。萤火虫萤光素酶检测试剂反复冻融5次对检测效果基本无影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%；4℃条件下，保存3天检测效果下降不超过20%，保存5天检测效果下降不超过30%，保存7天仍可保留60%以上的检测效果；室温保存1天可保留70%以上的检测效果，保存3天可保留60%以上的检测效果；37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。海肾萤光素酶检测缓冲液反复冻融10次、4℃和室温保存3天、37℃保存1天对检测效果的影响均不超过5%。海肾萤光素酶检测缓冲液反复冻融10次、4℃或室温保存3天对检测效果基本无影响，37℃保存1天对检测效果的影响不超过5%。海肾萤光素酶检测底物(100X)在4℃保存1周、室温保存1天检测效果下降不到10%，室温保存3天、37℃保存1天，仍可保留80%以上的活力。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence) [1]。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[2]。本试剂盒的检测原理参考图2.

图2. 双萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5'启动子区克隆在luciferase的上游，或把3'-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异[3]。

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择，请参考碧云天的相关网页：
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。

本试剂盒RG027和RG028分别可以测定100个和1000个样品。